کلونینگ، بیان و بررسی خصوصیات بیوشیمیایی و ساختاری آنزیم لاکاز جداشده از باکتری باسیلوس پامیلوس

لاکازها (1.10.3.2 ;ec پارادی فنولدی اکسیژن اکسیدوردوکتاز) بدلیل قابلیت اکسیداسیون طیف گسترده ای از ترکیبات فنولی کاربردهای زیادی در صنایع بیوتکنولوژی دارند. لاکازهاآنزیمهای چند مسی متعلق به گروه اکسیدازهای آبی هستند کهدی فنول ها و مواد وابسته را اکسیدکرده و اکسیژن مولکولی را به عنوان پذیرنده نهایی الکترون استفاده می کنند.در این پژوهش ژن کد کننده لاکاز از باکتری b.pumilus سویه gaz23بوسیله پرایمرهای کلونینگ تکثیر و سپس در ناقل بیانی (pet28a)کلون و به باکتریe.coliسویه bl21 انتقال یافت و آنالیز توالی انجام گرفت. ژن لاکاز حاوی 1533 نوکلئوتید بوده و 510 اسید آمینه را کد می کند.ژن لاکاز جدا شده از سویه gaz23 دارای 67% شباهت آمینو اسیدی به پروتئینcotaاز باسیلوس سوبتیلیس و 95% شباهت به لاکاز باسیلوس پامیلوس سویه safr-032 می باشد.بمنظور بدست آوردن مقادیر بالای پروتئین محلول ، بیان تحت شرایط آئروبیک و در دمای پایین انجام گرفت. پروتئین نوترکیب بوسیله ستون تمایلی تخلیص و وزن مولکولی آنزیم بوسیلهsds-page،68 کیلو دالتون تعیین گردید. خصوصیات بیوشیمیایی آنزیم با استفاده از دو سوبسترای معمول لاکاز2, 2’-azino-bis(3-ethylbenzothioazolin-6-sulphonic acid) (abts) وsyringaldazine (sgz)انجام گرفت.